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轉基因大豆‘ZH 10-6’數字PCR精準定量檢測方法的建立

劉雙  趙新  李瑞環  劉娜  蘭青闊  檀建新  王永  
【摘要】:為實現轉基因耐除草劑大豆品種‘ZH 10-6’轉化體成分的精準定量檢測,以轉基因大豆‘ZH 10-6’的5′端邊界序列為靶序列,設計PCR擴增引物和TaqMan探針,并對引物探針濃度進行優化,經特異性測試,建立了耐除草劑大豆品種‘ZH 10-6’的微滴式數字PCR檢測方法。結果表明:1)特異性良好:只有以轉基因耐除草劑大豆品種‘ZH 10-6’基因組為模板才有擴增信號;2)靈敏度高:在相對標準偏差≤25%的情況下,方法的檢出限(LOD)為13.0個拷貝;定量限(LOQ)為66.0個拷貝;3)PCR擴增反應模板含量與樣品拷貝數之間線性相關系數R20.99,DNA含量線性范圍為0.08%~100.00%。綜上,本研究建立的轉基因耐除草劑大豆‘ZH 10-6’轉化體定量方法特異性強、穩定性好、準確度和靈敏度高,可用于對轉基因大豆品種‘ZH 10-6’的定量檢測。

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